胭脂虫红色素是高效近年来逐步受到广泛应用的天然色素，是液相胭脂从寄生在仙人掌上的胭脂虫雌虫体内提取出的一种天然蒽醌类色素，主要成分是色谱胭脂红酸。20世纪90年代，法测我国首次从国外引进胭脂虫，定多的含并人工繁养成功，类食量2002年在云南省有规划种植胭脂虫。品中胭脂虫红因其稳定、虫红安全等特点，高效已成为优质的液相胭脂食用色素，它是色谱一种美国食品和药品监督管理局（FDA）允许既可用于食品，又可用于药品和化妆品的法测天然色素。

国家标准GB2760-2014中对胭脂虫红在不同种类食品中的定多的含使用限量进行了要求。国外一般采用美国化学品法典（FCC）的类食量标准法测定胭脂虫以及其相关产品中的胭脂虫红的含量，我国食品添加剂委员会则采用吸光度来表示胭脂虫红的品中含量，但是以上两种方法不能应用于食品中胭脂虫红含量的测定。近年来食品中胭脂虫红的相关检测方法的研究不断出现，如反相薄层色谱（TLC）/光密度扫描分析法、高效毛细管电泳法、液相色谱法和超高效液相色谱—质谱联用法，但是以上研究所涉及的食品种类较少。本文针对不同类型食品，包括糕点、饼干、糖果、巧克力、熟肉制品等五种，研究了胭脂虫红提取的前处理方法，建立了高效液相色谱法测定食品中的胭脂虫红的含量，可为以后食品中胭脂虫红的监督检测提供有效的参考方法。

一、实验部分

1、样品采集

采集了5种不同类型的样品，包装规格分为盒装、袋装及散装，分别为双莓味红丝绒蛋糕、香肠（原味）、棒棒糖、草莓味夹心饼干、巧克力豆。以上样品依次编号为1～5#。

2、仪器与试剂

Agilenttechnologies1260型高效液相色谱仪（美国Agilent）；分析天平（德国Sartorius）；台式冷冻离心机3K15（德国SIGMA）；恒温水浴锅DKZ-2B（上海精宏）；旋涡混匀器基本型-MS3basic（德国IKA）；聚酰胺固相萃取小柱（60mg/3mL）。

胭脂红酸（CAS1260-17-9，纯度91.7%，德国Dr.EhrenstorferGmbH）；乙腈；0.01%、0.05%、0.1%甲酸水溶液；0.1%磷酸水溶液；2mol/L盐酸溶液；酸化甲醇（甲酸∶甲醇=1∶50；v∶v）；氨水甲醇（体积分数为5%的氨水∶甲醇=1∶1；v∶v）；超纯水。

3、实验条件

（1）标准溶液的配制

准确称取胭脂虫红酸标准品0.1090g（精确称量至0.0001g）于100mL容量瓶中，用超纯水溶解、定容，配制成质量浓度为1000mg/L的储备液（于4℃下保存，保存期3个月）。以胭脂红酸标准溶液为母液，以超纯水为稀释液配制成质量浓度分别为2.50、5.00、10.0、20.0、40.0、100mg/L系列标准溶液，现配现用。

（2）样品前处理

①样品的制备：将样品用粉碎机充分粉碎，后装入洁净的可密封盛样容器中，密封并标明标记，于0℃～4℃冷藏保存。

②样品的提取与净化：称取粉碎均匀的样品2g置于50mL离心管中，加入2mol/L盐酸溶液10mL，旋紧盖子，置于80℃水浴中30min，取出冷却，之后再加入甲醇15mL，振摇混匀，待净化。

（3）色谱条件

（a）色谱柱：Agilent5TC-C185μm×4.6mm×150mm；

（b）柱温：35℃；

（c）进样量：20μL；

（d）检测波长：276nm；

（e）流速：1.0mL/min；

（f）流动相：A：0.05%甲酸水溶液；B：乙腈；梯度洗脱程序见表1。

二、结果与讨论

1、色谱条件的选择

（1）检测波长的选择通过二极管阵列检测器（DAD检测器）在190～600nm处进行扫描，结果见图1，发现胭脂红酸在紫外区最大吸收波长为276nm，在可见光区最大吸收波长为494nm。为对两个波长的检测结果进行比较，本研究检测波长同时选择276nm和494nm。如图2所示，胭脂红酸在276nm处吸收峰响应值最大，峰形较好。在494nm处峰形最好，且杂质干扰较小，但响应值不如276nm。为了达到更低的检出限，减少定量误差，试验选择检测波长为276nm。

（2）流动相的选择

本实验选用TC-C18（4.6mm×150mm，5μm）柱，通过实验分别比较了不同类型、不同比例的流动相的分离效果。在考虑色谱柱的耐酸性能基础上，实验分别用纯水、磷酸溶液、甲酸溶液作为水相，乙腈为有机相，共研究了乙腈-纯水、乙腈-磷酸溶液、乙腈-甲酸溶液三种体系对测定的影响。结果表明使用乙腈-纯水作为流动相时，完全洗脱不出；使用乙腈-磷酸溶液作为流动相时，出峰时间较慢，峰形出现拖尾现象；使用乙腈-甲酸溶液作为流动相时，分离效果好，峰形对称。

实验发现，pH的降低有利于改善胭脂红酸的峰形。本实验比较了分别以0.01%甲酸溶液和0.05%甲酸溶液作为流动相的分离效果，如图3。甲酸浓度为0.01%时，出峰时间延后，响应值足够高，然而峰形出现拖尾现象，峰较宽且不对称；甲酸浓度为0.05%时，响应值足够高且峰形效果好。因此本实验选择乙腈-0.05%甲酸溶液体系作为流动相，梯度程序淋洗。

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